替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

摘要：目的：分析替米沙坦联合氨氯地平对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响以及相关机制。方法新生1~3 d Wistar 大鼠30只，雌雄不拘，培养原代心肌细胞，采用差速贴壁获得心肌成纤维细胞，传代培养。取对数期成纤维细胞，分组并给予处理，对照组：加入15%胎牛血清DEME培养液，Ang Ⅱ组：15%胎牛血清DEME培养液+Ang Ⅱ，替米沙坦组：在Ang Ⅱ组基础上加入替米沙坦，氨氯地平组：在Ang Ⅱ组基础上加入氨氯地平，联合组：在Ang Ⅱ组基础上加入替米沙坦+氨氯地平。鉴定成纤维细胞。CCK-8法检测各组细胞增殖情况，应用免疫组化染色测定血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白水平，应用RT-PCR法测定LOX-1及TNF-α mRNA表达水平。结果心肌成纤维细胞胞体较大，胞浆透明，细胞呈梭形，细胞核呈椭圆形，通常含2~3个核，细胞纯度高达98%。与对照组相比，Ang Ⅱ组增殖活性升高，而加入替米沙坦和氨氯地平后，抑制Ang Ⅱ诱导的增殖，联合应用替米沙坦和氨氯地平较单药抑制作用更明显，差异有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组相比，Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞TNF-α及LOX-1 mRNA表达水平显著升高，差异有统计学意义（P均＜0.05）。各药物干预组与Ang Ⅱ组相比，TNF-α及LOX-1 mRNA表达水平显著降低，其中联合组下降明显，差异有统计学意义（P均＜0.05）。与对照组相比，Ang Ⅱ组心肌成纤维细胞TNF-α及LOX-1蛋白表达水平显著升高，差异有统计学意义（P均＜0.05）。各药物干预组与AngⅡ组相比，TNF-α及LOX-1蛋白表达水平显著降低，联合组较替米沙坦组和氨氯地平组两种蛋白的表达降低，差异有统计学意义（P均＜0.05）。结论替米沙坦联合氨氯地平能有效抑制Ang Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖，其可能机制为抑制LOX-1及TNF-α过度表达。