PI3K/AKt/eNOS信号通路在硫化氢抑制ET-1诱导的心肌肥大中的作用

摘要：目的：观察磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶（AKt）-内皮型一氧化氮合酶（eNOS）信号转导通路在硫化氢（H2S）抑制内皮素-1（endothelin-1，ET-1）诱导心肌肥大过程中的作用。方法体外培养原代心肌细胞，将其随机分为6组，每组4孔，①对照组：加入等体积无血清的DMEM培养基；②肥大（ET-1）组：加入终浓度为10-8 mol/L的ET-1；剩余4组为实验组，各组分别加入不同终浓度的H2S供体-NaHS：③10-15 M NaHS组：加入10-15 mol/L NaHS+10-8 mol/l ET-1；④10-14 M NaHS组：加入10-14 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑤10-13 M NaHS组：加入10-13 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑥10-12 M NaHS组：加入10-12 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1。上述各组药物分别刺激24 h后测定心肌细胞表面积、细胞总蛋白含量、培养液NO含量，RT-PCR检测心肌细胞心房利钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）、脑钠肽（B-type natriuretic peptide，BNP）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKt）、eNOS mRNA水平，Western Blot技术检测总AKt和磷酸化AKt蛋白表达含量。结果肥大（ET-1）组的心肌细胞表面积（1933.80±143.06）和细胞总蛋白含量（367.51±25.9）均高于对照组（787.27±107.66，218.55±21.28，P＜0.05），ANP及BNP mRNA的表达量也明显增加（P＜0.05），但PI3K、AKt、eNOS mRNA表达水平，磷酸化AKt程度和NO的释放量（4.60±0.73）低于对照组（8.63±0.30，P＜0.05），各实验组给予不同浓度NaHS刺激后能够浓度依赖性的抑制这种肥大效应（P＜0.05），同时上调了PI3K/AKt/eNOS通路各信号分子的表达量（P＜0.05）。结论H2S对ET-1诱导的心肌肥大有一定的抑制作用，这种作用可能与激活PI3K-AKt-eNOS信号通路有关。